细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位,细胞在机体的各项新陈代谢的生命活动中发挥着重要的作用,与此同时,细胞的生理过程,在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器,结合特异性的检测试剂,对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程,或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化,从而深入揭示细胞新陈代谢的具体机制。将上层细胞悬液倒入一个装有10mlMEF生长培养基的50ml离心管中,用200目的尼龙网过滤后,以1500rpm离心5分钟收集细胞,再用30mlMEF生长培养基洗涤两次。
杂交瘤细胞基因测序
杂交瘤细胞有丢失高特异性高活性的风险,或者细胞状态不好乃至。而经过杂交瘤测序,可以获得相应的序列,可以以重组蛋白的方式来稳定获得;从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该,而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行等知识产权方面的申请审批。有时为了进一步大规模生产或进行人源化等生物工程操作/修饰,有必要了解杂交瘤所表达的对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。一般流程:细胞收集-PI-AnnexinV标记-流式细胞仪检测。
相较于直接对进行基于蛋白质分析的测序相比,得益于基因测序技术的发展,杂交瘤测序可以提供的结果,防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。
BrdU染色原理
BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物,常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在,随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。2%戊er醛,37℃,4h,弃掉板中的处理液,用PBS洗涤3次,每次3min。
zhu射或细胞培养后利用抗Brdu单,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在,所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合,不能直接与抗Brdu反应,需经解链使Brdu暴露方能被染色。电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等,使DNA双链部分单链化,抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合,再经酶标抗小鼠IgG孵育、
呈色,显示进入S期细胞的情况。